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懸浮細(xì)胞如何固定做免疫熒光等后續(xù)實驗?

更新時間:2023-10-21   點擊次數(shù):1945次

懸浮細(xì)胞呈現(xiàn)懸浮狀態(tài)生長,如何固定?是所有后續(xù)實驗的第一步,也是關(guān)鍵的一步,也是難倒很多人的的一步。靶點科技懸浮細(xì)胞專用固定玻片Shi-Fix,提供全新的痛點解決方案。L-多聚賴氨酸等傳統(tǒng)老掉牙的作坊式方法被詬病,被淘汰。

您是否希望懸浮細(xì)胞的免疫熒光像貼壁細(xì)胞一樣容易?現(xiàn)在就是這樣!靶點科技Shi-Fix懸浮細(xì)胞免疫熒光專用玻片直擊痛點。

細(xì)胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究,相互作用研究和細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究。細(xì)胞免疫熒光就是將免疫學(xué)方法和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合,研究特異性抗原在細(xì)胞內(nèi)的分布。細(xì)胞免疫熒光特性高,敏感性強,速度快,主要原理也是利用抗原抗體反映抗原抗體結(jié)合后再用熒光標(biāo)記,通過顯微鏡下觀察來確定某種特異性抗原是否存在。

根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞類型,可分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞(淋巴細(xì)胞,血液的白細(xì)胞)。貼壁細(xì)胞有天然貼壁的屬性,而懸浮細(xì)胞不依賴支持物表面,在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長。

免疫熒光實驗的基礎(chǔ)前提就是讓細(xì)胞能固定在玻片上。懸浮細(xì)胞如何貼壁或者固定到玻片上,是業(yè)內(nèi)科研人員面對的一個難題。傳統(tǒng)上,或用細(xì)胞離心甩片機制備細(xì)胞片或直接涂片法制備細(xì)胞涂片,然后把細(xì)胞片于乙醇或丙酮或多聚甲醛固定。無論甩片還是涂片,都是黑盒子實驗。每個人操作手法不一樣,即使同一個人操作,每一批實驗,也都沒法評價細(xì)胞片上的細(xì)胞固定的情況,而這一步至關(guān)重要。盲目而又沒底的只能硬著頭皮往下做。浪費的不僅是時間,還有抗體等很多試劑。如何解決這些痛點?懸浮細(xì)胞免疫熒光專用玻片Shi-Fix Coverslips帶來痛點解決方案!

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靶點科技Shi-fix玻片允許懸浮細(xì)胞分層或直接作為單層生長。簡單,無憂的實驗方案,無需離心即可將懸浮細(xì)胞固定到載玻片上。只需將細(xì)胞添加到載玻片上,等待30分鐘,用PBS洗滌未結(jié)合的細(xì)胞并繼續(xù)免疫染色(或繼續(xù)培養(yǎng)以獲得所需的細(xì)胞密度)。

這些玻片也可用于染色懸浮細(xì)胞以進行顯微鏡檢查,或用于固定懸浮細(xì)胞以進行共聚焦顯微鏡檢查。更重要的是,如果需要,您還可以在細(xì)胞附著在玻片上時刺激它們。您可以像貼壁細(xì)胞一樣處理非貼壁細(xì)胞!


簡單四步法固定懸浮細(xì)胞

1. 使用 PBS 清洗細(xì)胞,并將細(xì)胞重新懸浮于 PBS 中(2-5 百萬個/ml)

2. 把懸浮細(xì)胞專用免疫熒光玻片放置于12孔或者6孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔里,直接滴加細(xì)胞于懸浮細(xì)胞專用免疫熒光玻片上(每個玻片上 20-30 萬個細(xì)胞)

3. 使細(xì)胞附著30分鐘,有些細(xì)胞需要延長附著時間,但不要超過1小時。使用約 2ml PBS沖洗掉未結(jié)合細(xì)胞(切勿直接垂直滴加PBS到玻片上的細(xì)胞,可將 PB滴加于板孔側(cè)邊,然后輕輕搖晃 3-5分鐘)

4. 在顯微鏡下檢查細(xì)胞附著情況,如果需要進一步培養(yǎng),那么加入 1ml培養(yǎng)基即可;若不培養(yǎng)即可直接固定,染色。



懸浮細(xì)胞固定免疫熒光圖


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